|
|
|
|
جستجو در مقالات منتشر شده |
|
|
2 نتیجه برای Real Time Pcr
نیره سادات جنابان، الهه علی عسگری، کیومرث امینی، دوره 23، شماره 3 - ( 7-1400 )
چکیده
زمینه و هدف: استرپتومایسسها باکتریهای رشتهای گرم مثبت و هوازی هستند که از منابع متفاوت جدا میشوند. این باکتریها توانایی تولید متابولیتهای ثانویه و مواد فعال بیولوژیکی را دارند و از این جهت در زمینه بیوکنترل بسیار حائز اهمیت هستند. اورات اکسیداز یکی از فراوردههای آنزیمی میکروبی است که از منابع مختلفی از جمله استرپتومایسس قابل استخراج است. این مطالعه به منظور کلونینگ و بیان ژن اورات اکسیداز استرپتومایسس جدا شده از دریا در باکتری اشریشیاکلی اوریگامی انجام شد.
روش بررسی: در این مطالعه توصیفی تعداد 60 نمونه آب و رسوب از اعماق متفاوت سواحل دریای خزر در استان مازندران جمعآوری گردید. آزمونهای رنگ آمیزی گرم، متیل رد،VP، سیترات، هیدرولیز نشاسته، هیدرولیز کازئین، احیا نیترات، اکسیداز وکاتالاز برای تعیین هویت و جداسازی استرپتومایسس دریا انجام شد. ژن اورات اکسیداز توسط روش کلونینگ T-A با استفاده از وکتور PTG-19 در درون میزبان اشریشیاکلی اوراگامی کلون گردید. بیان ژن کلون شده در کلنیهای نوترکیب توسط روش Real time PCR بررسی شد. با استفاده از نرمافزارهای clustalX و Mega5درخت فیلوژنی رسم گردید.
یافتهها: غربالگری نمونههای آب دریا 12 ایزوله استرپتومایسس را شناسایی کرد که همگی دارای ژن اورات اکسیداز بودند. بیان ژن اورات اکسیداز در اشریشیاکلی اوریگامی توسط روش Real-Tima PCR به اثبات رسید. نتـایج بررسیهای فیلوژنتیکی، برخی خویشاوندان نزدیک استرپتومایسس را به عنوان کاندید مطالعات بعدی معرفی نمود.
نتیجهگیری: باکتری استرپتومایسس میتواند به عنوان منبع غنی از متابولیتهای ثانویه با کاربردهای فراوان مورد توجه قرار گیرد و به عنوان سویهای بومی به منظور تولید آنزیم اورات اکسیداز به کار رود. با به کار بردن میزبانهای کلونینگ مختلف و بررسی شرایط بهینه تولید، این سویه میتواند نامزد مطالعات آینده به منظور ساخت داروها و ترکیبات ضدمیکروبی باشد.
ثمین بابازاده، کیومرث امینی، مهسا کاوسی، دوره 23، شماره 4 - ( 10-1400 )
چکیده
زمینه و هدف: سودوموناس آئروژینوزا پاتوژنی فرصت طلب، عامل عمده مرگ و میر در بیماران با ضعف سیستم ایمنی است. کوروم سنسینگ یکی از عوامل مهم در بیماریزایی و مقاومت به مواد ضدمیکروبی در این باکتری است. این مطالعه به منظور تعیین اثر مورین بر بیان ژنهای کوروم سنسینگ در سودوموناس آئروژینوزا جدا شده از زخم سوختگی انجام شد.
روش بررسی: این مطالعه توصیفی - تحلیلی روی 60 نمونه زخم سوختگی جمعآوری شده از بیماران بستری در بیمارستانهای تهران انجام شد. نمونهها با استفاده از روشهای کشت و بیوشیمیایی تعیین هویت شد. DNA ایزولهها استخراج شد. سپس با استفاده از روش میکروبراث دایلوشن خاصیت ضد میکروبی مورین علیه سودوموناس آئروژینوزا سنجیده شد. همچنین حضور ژنهای اختصاصی کوروم سنسینگ سودموناس آئروژینوزا با استفاده از Multiplex-PCR مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت با استفاده Real time PCR و روش سایبرگرین در مجاورت مورین کاهش و یا افزایش بیان ژن lasI در باکتری سودوموناس آئروژینوزا بررسی شد.
یافتهها: با استفاده از روش Multiplex-PCR 12 نمونه (20 درصد) باکتری سودوموناس آئروژینوزا جداسازی شدند که 12 ایزوله (100درصد) حامل ژن lasI ، 12 ایزوله (100درصد) حامل ژن lasR و 3 ایزوله (25 درصد) حامل ژن rhlI بودند. خاصیت ضدمیکروبی مورین علیه یک ایزوله سودموناس آئروژینوزا دارای هر سه ژن تولید QS نشان داد که این ماده دارای خاصیت ضدمیکروبی علیه سودموناس آئروژینوزا بوده و حداقل غلظت مهاری آن 125 میکروگرم بر میلیلیتر تعیین شد. غلظت Sub-MIC مورین در باکتری سودوموناس آئروژینوزا سبب کاهش بیان ژن lasI در سودموناس آئروژینوزا گردید (P<0.05).
نتیجهگیری: مورین خاصیت ضدمیکروبی اثربخش و قابل توجهی علیه سودوموناس آئروژینوزا داشت.
|
|
|
|
|
|