8906160129 61 دانشگاه علوم پزشكي گلستان مركز تحقيقات بيوشيمي و اختلالات متابوليك
The Effect of Naringenin (NGEN) on the Apoptosis and Gene Expression of Telomerase Enzyme in T47D Cell Line of Breast Cancer اثر نارينژنين((NGEN بر روند آپوپتوز و بيان ژن آنزيم تلومراز در رده سلول سرطاني پستان T47D آپوپتوز مرگ برنامه ريزي شده سلولي است كه از ويژگي هاي آن كوچك شدن سيتوپلاسم و تجمع هسته آن مي باشد . در اغلب سلول هاي سرطاني روند آپوپتوز بلوكه مي شود. يكي از عوامل مهمي كه سبب تداوم رشد و تكثير سلول هاي ناميرا مانند سلول هاي سرطاني مي شود، آنزيم تلومراز است. تلومراز در اغلب سلول هاي سوماتيك طبيعي انسان وجود ندارد، اما در بيشتر از 90 درصد سلول هاي سرطاني و سلول هاي فناناپذير دچار تنظيم افزايشي مي گردد. بررسي هاي اخير روي تركيباتي متمركز شده اندكه بتوانند پديده آپوپتوز را در سلول هاي سرطاني القاء كنند. فلاونوئيدها فراوان ترين آنتي اكسيدان هاي رژيم غذايي انسان هستند و از ميان آنها نارينژنين((NGEN به مقدار فراوان در گريپ فروت و مركبات و آب ميوه ها وجود دارد ، اخيراً گزارش شده است كه NGEN ، احتمالاً مي تواند آپوپتوز را در سلولهاي سرطاني مختلف انساني القاء كند. سرطان پستان، شايع ترين سرطان در زنان و اولين علت مرگ ناشي از سرطان در زنان 44-40 ساله است. اين بدخيمي، 33% سرطان هاي زنان را تشكيل داده و مسؤول 19% از مرگ هاي وابسته به سرطان مي باشد. بنابر اين مطالعات بر روي درمان اين نوع سرطان به كمك القاء آپوپتوز اهميت زيادي دارند. تحقيقات بيشتر جهت اثبات اثرات مفيد نارينژنين و تركيبات آنتي اكسيدان ديگر مي تواند گام جديدي در راستاي كشف داروهاي موثر براي درمان سرطان باشد. ما در اين مطالعه براي اولين بار در رده سلولي سرطان T47D اثر احتمالي نارينژنين را روي القاي آپوپتوز و تغيير سطح آنزيم تلومراز بررسي خواهيم كرد. نارينژنين - آپوپتوز - آنزيم تلومراز - سلول سرطاني پستان T47D 1288137600 24 سرطان پستان، شايع ترين سرطان در زنان و اولين علت مرگ ناشي از سرطان در زنان 44-40 ساله است. اين بدخيمي، 33% سرطان هاي زنان را تشكيل داده و مسؤول 19% از مرگ هاي وابسته به سرطان مي باشد. بنابر اين مطالعات بر روي درمان اين نوع سرطان به كمك القاء آپوپتوز اهميت زيادي دارند 1-تعيين اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن آنزيم تلومراز در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل
2-تعيين اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن هاي Bcl-2،Bax ، Akt، PI3K،Caspase ، P53، PARP و Fas در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل
3- مقايسه اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن آنزيم تلومراز در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل
4- مقايسه اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن هاي Bcl-2،Bax ، Akt، PI3K،Caspase ، P53، PARP و Fas در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل 1.هدف اختصاصي اول: تعيين اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن هاي Bcl-2،Bax ، Akt، PI3K،Caspase ، P53، PARP و Fasدر محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل
الف) خلاصه روش اجرا: براي تعيين اثر نارينژنين((NGEN در كشت سلولي سرطاني پستان (T-47D) و سالم در محيط In vitro نتايج بررسي مورد بررسي قرار مي گيرد. به همين منظور رده سلولي سرطاني پستان(T-47D) از انستيتو پاستور خريداري مي شود. سپس اين رده سلولي در محيط كشت Dulbeco,s modified Eagle,s همراه با سرم گاوي 10% در اتمسفر حاوي CO2 5% و در دماي 37 درجه سانتيگراد و04/7= pHدر انكوباتور CO2 دار(شرايط متعارفي در اين آزمايش)كشت داده مي شود، تا به حد نصاب سلول هاي مورد نياز (در هر پليت يك ميليون سلول بايد باشد) براي تيمار شدن برسند كه در هرگروه مورد و گروه كنترل مي بايست سه پليت يك ميليون سلولي باشد. بعد از اينكه تعداد مورد نظر حاصل شد، اين سلول ها را با دوزهاي مختلف متفورمين انكوبه مي كنيم. مشخص كردن دوز لازم براي تيمار كردن، براساس مطالعات مشابه در اين زمينه و Pilot Study(مطالعه آزمايشي) است كه بهترين دوز و زمان انتخاب مي شود. بعد از انتخاب دوز و زمان و تعيين گروه ها، سلول ها توسط اين تركيبات تيمار خواهند شد. قابل ذكر است گروه كنترل به گروهي گفته مي شود كه سلول هاي سرطاني T-47D در محيط كشت سلولي، بدون هيچ تيماري قرار مي گيرند. بعد از مدت معين و مشخص، سلولهاي چسبيده به فلاسك توسط تريپسين برداشت شده و پس از استخراج RNAي سلول ها و طراحي پرايمر آنها، بيان ژن هاي Bcl-2،Bax ، Akt، PI3K،Caspase ، P53، PARP و Fas با استفاده از روش Real Time-PCR اندازه گيري مي شود و در اينحال محصول آن بر روي ژل آگارز، الكترفورز مي گردد.

2.هدف اختصاصي دوم: تعيين اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن آنزيم تلومراز در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل
الف) خلاصه روش اجرا: براي تعيين اثر نارينژنين((NGEN بر سطح بيان ژن آنزيم تلومراز در محيط كشت سلولي سرطاني پستان و سلول كنترل مورد بررسي قرار مي گيرد.به همين منظور رده سلولي مورد نظر را در محيط Dulbeco,s modified Eagle,s همراه با سرم گاوي 10% در اتمسفر حاوي CO2 5% كشت مي داده و سپس آنرا با دوزهاي مختلف نارينژنين انكوبه مي كنيم. بعد از مدت معين سلولهاي چسبيده به فلاسك برداشت شده و پس از استخراج پروتئين سلول ها و اندازه گيري پروتئين تام، فعاليت آنزيم تلومراز با استفاده از روش PCR-ELISA اندازه گيري مي شود . 85674000 دانشگاه علوم پزشكي گلستان 1288137600 0 بلي بلي فعال و منتشر شده 1309910400