[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: معرفي مجله :: آخرين شماره :: آرشيو مقالات :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 19، شماره 4 - ( زمستان 1396 ) ::
جلد 19 شماره 4 صفحات 92-99 برگشت به فهرست نسخه ها
بیان ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سلول‌های تخمدان همستر چینی به روش RT-PCR
نغمه میرابوالقاسمی1، عباس دوستی 2
1- کارشناس ارشد ژنتیک، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2- دانشیار، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران ، abbasdoosti@yahoo.com
چکیده:   (1057 مشاهده)

زمینه و هدف : عفونت هلیکوباکترپیلوری یکی از شایع‌ترین عفونت‌های مزمن باکتریایی در جهان به‌ویژه در کشورهای در حال توسعه است. ژن leoA نقش مهمی در بیماری‌زایی ایفا می‌کند و نقش اصلی این ژن افزایش ترشح سم توسط باکتری است. این مطالعه به منظور جداسازی و کلون‌سازی ژن leoA در وکتور بیانی pEGFP-C2 و بررسی بیان آن به روش RT-PCR در سیستم یوکاریوتی انجام شد.

روش بررسی : در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن leoA از ژنوم هلیکوباکترپیلوری سویه استاندارد (ATCC 43504) به روش PCR تکثیر و جداسازی شد. سپس با روش کلون‌سازی T/A در ناقل pTZ درج گردید. ساب کلونینگ این ژن در وکتور بیانی pEGFP-C2 با آنزیم لیگاز انجام شد. سپس سازواره نهایی pEGFP-C2-leoA به روش الکتروپوریشن در سلول‌های تخمدان همستر چینی
(Chinese hamster ovary: CHO) ترانسفرم گردید و بیان ژن leoA با روش SDS-PAGE و RT-PCR ارزیابی شد.

یافته‌ها : نتایج PCR نشان‌دهنده تکثیر قطعه 1758 جفت بازی مربوط به ژن leoA بود. کلون‌سازی این ژن به ترتیب در وکتورهای pTZ و pEGFP-C2 با موفقیت انجام شد. هضم آنزیمی با دو آنزیم KpnI وSacII و همچنین تعیین توالی، صحت کلون سازی ژن را تایید کرد. مشاهده محصول پروتئینی ژن leoA در سلول‌های CHO نشان‌دهنده بیان موفقیت‌آمیز ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سیستم یوکاریوتی بود.

نتیجه‌گیری : سازواره نهایی pEGFP-C2-leoA ، قدرت بیان موفق ژن leoA در سلول‌های جانوری را داشت.

واژه‌های کلیدی: هلیکوباکترپیلوری، ژن leoA، الکتروپوریشن، واکسن نوترکیب
متن کامل [PDF 312 kb] [English Abstract]   (128 دریافت) |   |   متن کامل (HTML)  (97 مشاهده)  
نوع مطالعه: توصیفی آزمایشگاهی | موضوع مقاله: ژنتیک
فهرست منابع
1. Tomb JF, White O, Kerlavage AR, Clayton RA, Sutton GG, Fleischmann RD, et al. The complete genome sequence of the gastric pathogen Helicobacter pylori. Nature. 1997 Aug; 388(6642): 539-47. [DOI]
2. Roesler BM, Rabelo-Gonçalves EM, Zeitune JM. Virulence factors of Helicobacter pylori: A review. Clin Med Insights Gastroenterol. 2014 Mar; 7: 9-17. [DOI]
3. Ruggiero P, Censini S. Helicobacter pylori: A brief history of a still lacking vaccine. Diseases. 2014; 2(2): 187-208. [DOI]
4. Souod N, Kargar M, Doosti A, Ranjbar R, Sarshar M. Genetic analysis of cagA and vacA Genes in Helicobacter Pylori isolates and their relationship with gastroduodenal diseases in the West of Iran. Iran Red Crescent Med J. 2013 May; 15(5): 371-75. [DOI]
5. Wang F, Meng W, Wang B, Qiao L. Helicobacter pylori-induced gastric inflammation and gastric cancer. Cancer Lett. 2014 Apr; 345(2): 196-202. [DOI]
6. Rahimian G, Sanei MH, Shirzad H, Azadegan-Dehkordi F, Taghikhani A, Salimzadeh L, et al. Virulence factors of Helicobacter pylori vacA increase markedly gastric mucosal TGF-alpha1 mRNA expression in gastritis patients. Microb Pathog. 2014 Feb-Mar; 67-68: 1-7. [DOI]
7. Doosti A, Rahimian G, Nassiri J, Yavari-Forushani P. [Prevalence of the cagA-positive Helicobacter pylori strains isolated from gastric biopsy specimens in Shahrekord]. Armaghane Danesh. 2007; 12(1): 29-38. [Article in Persian]
8. Michie KA, Boysen A, Low HH, Møller-Jensen J, Löwe J. LeoA, B and C from enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) are bacterial dynamins. PLoS One. 2014 Sep; 9(9): e107211. [DOI]
9. Brown EA, Hardwidge PR. Biochemical characterization of the enterotoxigenic Escherichia coli LeoA protein. Microbiology. 2007 Nov; 153(Pt 11): 3776-84. [DOI]
10. Vaise Malekshahi Z, Hatef Salmanian A, Ebrahimizadeh W, Amiri Javid Sh. [The effect of DNA vaccine induced IgY against C-Urease in mice infected with Helicobacter pylori]. Med J Tabriz Univ Med Sci. 2012; 34(5): 79-86. [Article in Persian]
11. Hajikhani B, Najar-Piraye S, Soliman-Jahi H, Zuhair MH. [Cloning, expression, purification and study of the antigenicity of Helicobacter pylori UreB332-HpaA protein]. Modares Journal of Medical Sciences. 2013; 13(2): 1-10. [Article in Persian]
12. Jalali Kondori B, Asadi MH, Azemati F. [Subcloning of NGF Gene into pSecTag2/Hygro Secretory Vector and Expression in PC12 Cell Line]. Shefaye Khatam. 2014; 3(1): 21-28. [Article in Persian]
13. Del Giudice G, Covacci A, Telford JL, Montecucco C, Rappuoli R. The design of vaccines against Helicobacter pylori and their development. Annu Rev Immunol. 2001; 19: 523-63. [DOI]
14. Every AL, Stent A, Moloney MB, Ng GZ, Skene CD, Edwards SJ, et al. Evaluation of superoxide dismutase from Helicobacter pylori as a protective vaccine antigen. Vaccine. 2011 Feb; 29(7): 1514-18. [DOI]
15. Doosti A, Ghasemi- Dehkordi P, Kargar M, Sharifi A. Generation of divalent DNA vaccine based on p39 and shiga-like toxin 2 (Stx2) genes. Genetica. 2015; 47(2): 499-507. [DOI]
16. Doosti A. [Cloning of the gene encoding neurotoxin heavy chain of Clostridium botulinum in E. Coli]. Journal of Microbial World. 2013; 5(3-4): 77-84. [Article in Persian]
17. Hu Z, Ulfendahl M, Olivius NP. NGF stimulates extensive neurite outgrowth from implanted dorsal root ganglion neurons following transplantation into the adult rat inner ear. Neurobiol Dis. 2005 Feb; 18(1): 184-92. [DOI]
18. Michetti P, Kreiss C, Kotloff KL, Porta N, Blanco JL, Bachmann D, et al. Oral immunization with urease and Escherichia coli heat-labile enterotoxin is safe and immunogenic in Helicobacter pylori-infected adults. Gastroenterology. 1999 Apr; 116(4): 804-12.
19. Sutton P, Doidge C, Pinczower G, Wilson J, Harbour S, Swierczak A, et al. Effectiveness of vaccination with recombinant HpaA from Helicobacter pylori is influenced by host genetic background. FEMS Immunol Med Microbiol. 2007 Jul; 50(2): 213-9. [DOI]
20. Shi Y, Wu C, Zhou WY, Mao XH, Guo G, Zou QM. Identification of H-2d restricted Th epitopes in Urease B subunit of Helicobacter pylori. Vaccine. 2007 Mar; 25(14): 2583-90. [DOI]
21. Malfertheiner P, Schultze V, Rosenkranz B, Kaufmann SH, Ulrichs T, Novicki D, et al. Safety and immunogenicity of an intramuscular Helicobacter pylori vaccine in noninfected volunteers: a phase I study. Gastroenterology. 2008 Sep; 135(3): 787-95. [DOI]
22. Najar Peerayeh Sh, Atoofi J, Hoseinkhani S, Farshchian M. Cloning and expression of Helicobacter pylori HpaA Gene. Yakhteh Medical Journal. 2009; 11(3): 273-6.
23. Liu KY, Shi Y, Luo P, Yu S, Chen L, Zhao Z, et al. Therapeutic efficacy of oral immunization with attenuated Salmonella typhimurium expressing Helicobacter pylori CagA, VacA and UreB fusion proteins in mice model. Vaccine. 2011 Sep; 29(38): 6679-85. [DOI]
24. Gong Y, Tao L, Wang F, Liu W, Jing L, Liu D, et al. Chitosan as an adjuvant for a Helicobacter pylori therapeutic vaccine. Mol Med Rep. 2015 Sep; 12(3): 4123-32. [DOI]
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Mirabolghasemi N, Doosti A. Expression of leoA gene of Helicobacter pylori in CHO animal cells by RT-PCR method . J Gorgan Univ Med Sci. 2017; 19 (4) :92-99
URL: http://goums.ac.ir/journal/article-1-3209-fa.html

میرابوالقاسمی نغمه، دوستی عباس. بیان ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سلول‌های تخمدان همستر چینی به روش RT-PCR. مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي گرگان. 1396; 19 (4) :92-99

URL: http://goums.ac.ir/journal/article-1-3209-fa.html



دوره 19، شماره 4 - ( زمستان 1396 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله علمی دانشگاه علوم پزشکی گرگان Journal of Gorgan University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3667